黑曲霉柠檬酸工业菌株原生质体制备与转化

• 作者: 于建东 刘浩 孙际宾 张晓立 满云 罗虎 郑小梅 郑平
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 黑曲霉 柠檬酸 遗传操作系统 原生质体 DNA转化
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 171-177
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.04.025

摘要

黑曲霉是柠檬酸工业化生产的主要发酵菌株。尽管现代遗传操作技术在黑曲霉的实验室菌株、蛋白质生产菌株等的应用中获得了成功，但是柠檬酸工业菌株遗传转化异常困难，成为柠檬酸工业持续升级的重要限制因素。以柠檬酸工业生产实际应用的黑曲霉菌株为研究对象，对其原生质体的制备与再生以及PEG介导的转化等条件进行了细致优化。结果表明，柠檬酸高产工业菌株原生质体的制备需选取丰富培养基中培养48 h的年轻菌丝体，在1.5%裂解酶-0.5%蜗牛酶-0.2%溶菌酶的复合酶解体系下裂解2.5 h，原生质体的制备浓度可达106个/mL以上，原生质体再生效率可达90%以上。原生质体的浓度是原生质体-PEG介导转化方法的关键，当原生质体浓度达到106个/mL以上时，高产柠檬酸菌株的转化效率大幅提高。成功建立了由原生质体-PEG所介导的高产柠檬酸黑曲霉菌株的遗传转化体系。