Ki-67阴性结直肠癌细胞的增殖和自我更新能力的研究

• 作者: 穆磊 胡艺冰 覃吉超 颜畅 黄开禹
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Ki-67 结直肠癌 慢增殖 自我更新 肿瘤干细胞
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 134-137
• 页数: 4页
• 分类号: R735.3
• 字数: 3303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2015.02.002

摘要

目的 观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用.方法 通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+ EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/low EpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力.结果 从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+ EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+ EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)％的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)％的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)％和(4.57±1.05)％ PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P＜0.01),提示Ki-67-/1ow细胞主要是G0/G1期细胞,在体内处于慢增殖状态;荧光定量PCR证明Ki-67-/low细胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平为Ki-67+细胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差异有统计学意义(P＜0.05),体外成球实验,Ki-67-/low及Ki-67+细胞的成球数量分别为(83.00±9.54)和(8.00±2.66) (P＜0.01),提示Ki-67-/low细胞高表达CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关标记物,并具有显著的自我更新能力,富集肿瘤干细胞.结论 Ki-67阴性的结直肠癌细胞具有慢增殖的特点,较Ki-67阳性结直肠癌细胞具有更强的成球能力,在结直肠癌的自我更新中起重要作用,并有可能作为肿瘤干细胞的标记物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	覃吉超	华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心	14	46	4.0	6.0
2	胡艺冰	华中科技大学同济医学院附属同济医院甲乳外科	7	21	3.0	4.0
3	颜畅	华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心	5	10	2.0	3.0
4	穆磊	华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心	6	13	2.0	3.0
5	黄开禹	华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心	5	10	2.0	3.0