利用293细胞拯救和扩增重组人41型腺病毒

• 作者: 洪涛 王敏 肖蓉 邹小辉 郭小娟 鲁茁壮
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人41型腺病毒 病毒载体 反向遗传 E4orf6
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 515-523
• 页数: 9页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

人41型腺病毒(Human adenovirus type 41,HAdV-41)为难养腺病毒,E1区缺失的HAdV-41无法在293细胞中拯救并扩增,本研究试图通过反向遗传学操作获得能够在293细胞中拯救并扩增的重组HAdV-41.首先,对原有的骨架质粒pAdbone41进行改造:通过重叠延伸PCR方法将HAdV-41的E3区基因替换为HAdV-5 E4orf6编码区;将HAdV-5 E1A增强子克隆至HAdV-41 E4区启动子上游,获得新的骨架质粒pAdbone41E4EE.该骨架质粒与线性化的穿梭质粒pSh41-GFP在E.coli BJ5183菌株同源重组得到腺病毒质粒pAd41E4EE-GFP.pAd41 E4EE-GFP经Pme Ⅰ酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组病毒HAdV-41-E4EE-GFP.经过7轮扩增,超速离心纯化后获得1.0 ml浓度为8.0×1010 vp/mL的重组腺病毒,其感染滴度为1.7×109 IU/mL,电子显微镜下观察可见形态完整的病毒颗粒,限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定结果均表明携带HAdV-5 E4orf6基因与E1A增强子基因的重组腺病毒载体构建正确.本研究利用反向遗传学技术对病毒载体进行改造,实现了在293细胞中培养E1区缺失的HAdV-41的目的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪涛		74	361	10.0	15.0
2	鲁茁壮		17	7	1.0	2.0
3	王敏		33	56	4.0	5.0
4	郭小娟		6	1	1.0	1.0
5	邹小辉		10	6	1.0	2.0
6	肖蓉		2	0	0.0	0.0