1株犬细小病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

• 作者: 卜宾 唐存多 唐青海 姚伦广 李生涛 毛倩倩 焦铸锦 阚云超
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 犬细小病毒 分离 免疫过氧化物酶单层细胞染色法 生物学特性
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧? 兽医
• 页码范围: 121-127,140
• 页数: 8页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5337字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2015.08.027

摘要

采集一疑似犬细小病毒( CPV)患犬的粪便,采用胶体金试纸条和PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法( IPMA)和PCR检测病毒在F81细胞中的增殖动态,采用无血清培养和有血清培养2种方法进行体外培养,IPMA测定病毒滴度。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,经序列测定后采用DNAStar 7.0和MEGA 5.0软件进行生物信息学分析。结果表明,胶体金试纸条检测为CPV抗原阴性, PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变( CPE ),血清学鉴定为CPV抗原阳性,将分离得到的病毒命名为CPV-NY130615。 IPMA可从感染后6 h的 F81细胞中检出病毒,PCR能从感染后6 h培养上清中检出CPV核酸。血清同步接种培养法培养和无血清单层接种培养法培养的第15代病毒滴度分别为1×108.06 TCID50/mL和1×107.65 TCID50/mL。序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框( ORF)为1755 bp,编码584 aa。进化分析显示,该毒株属于CPV-2 a型。