基于EB1基因的环介导等温扩增(LAMP)法检测感染家蚕微粒子病的蚕卵

• 作者: 刘吉平 晏育伟 杨吉龙 程伟 魏建影
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 微粒子病 微孢子虫 环介导等温扩增 荧光指示剂 凝胶电泳 聚合酶链式扩增
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 病理
• 页码范围: 846-855
• 分类号: Q965.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2015.08.004

摘要

[目的]家蚕Bombyx mori微粒子病一直影响着蚕种业的健康发展,快速而准确地检测出寄生于蚕卵中的家蚕微孢子虫Nosema bombycis对于有效控制家蚕微粒子病危害意义重大.[方法]环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)法是一种快速、灵敏、特异的DNA体外恒温扩增方法,本文基于LAMP检测法的原理,依据家蚕微孢子虫孢子繁殖复制相关的EB1基因(GenBank登录号:KF421134.1)设计LAMP引物,对LAMP反应体系的最佳反应温度、内外引物浓度比、检测反应的特异性、灵敏度等进行研究,建立了一种检测蚕卵感染家蚕微粒子病的LAMP检测方法.[结果]结果表明,基于EB1基因建立的LAMP检测方法在63℃恒温下在1.5h内就可完成对样品的有效检测,本LAMP法对家蚕微孢子虫孢子DNA的检测灵敏度为5.0×10-3 ng/μL,对EB1-pMDTM19-T质粒标准品的检测灵敏度为1.0×102 copies/μL,同时对人工感染家蚕微粒子病单个母蛾产下蚕卵的1/8卵圈量或1粒蚕卵均能检出阳性结果.上述结果都分别应用凝胶电泳法、恒温荧光检测仪以及SYBR Green Ⅰ显色肉眼观察法得到同步判定.[结论]本研究建立的基于EB1基因LAMP法可用于蚕卵微粒子病的检测,LAMP法为蚕种质量检验及成品卵微粒子病现场检疫提供了新技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘吉平	华南农业大学动物科学学院	73	759	15.0	25.0
2	杨吉龙	华南农业大学动物科学学院	3	17	2.0	3.0
3	魏建影	华南农业大学动物科学学院	3	24	3.0	3.0
4	程伟	华南农业大学动物科学学院	2	10	1.0	2.0
5	晏育伟	华南农业大学动物科学学院	1	10	1.0	1.0