摘要:
目的 探讨二甲双胍对角质形成细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法 以HaCaT细胞为研究对象,分别给予不同浓度二甲双胍(25、50、75、100 mmol/L)刺激24 h,CCK8法检测HaCaT细胞增殖活性;实时定量PCR法检测HaCaT细胞中miR-21-5p及其下游靶基因PDCD4 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测HaCaT细胞中PDCD4蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.结果 二甲双胍可抑制HaCaT细胞增殖,25、50、75、100 mmol/L二甲双胍作用于HaCaT细胞24 h后,细胞抑制率分别为5.43%±3.67%、19.61%±6.95%、45.93%±9.56%、61.91%±6.93%,各组细胞抑制率差异有统计学意义(F=246.90,P<0.05);25 mmol/L组与对照组(0.00%±3.00%)相比,差异无统计学意义,其余各组抑制率均较对照组显著增高(P<0.05);实验组不同浓度组间比较,差异也均有统计学意义(P<0.05).25、50、75、100 mmol/L二甲双胍实验组miR-21-5p mRNA相对表达量(2-△△Ct)分别为0.90±0.11、0.33±0.05、0.21±0.07、0.14±0.04,PDCD4mRNA相对表达量(2-△△Ct)分别为2.11±0.64、7.22±1.13、11.16±1.23、19.12±3.16,各组细胞miR-21-5p mRNA和PDCD4 mRNA的表达差异均有统计学意义(F值分别为36.99和96.26,均P<0.05);25 mmol/L组与对照组相比,差异无统计学意义,其余各组miR-21-5p及PDCD4 mRNA的表达均较对照组显著下调或上调(均P<0.05);实验组不同浓度组间比较,差异也均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,25、50、75、100 mmol/L二甲双胍实验组PDCD4蛋白表达明显升高,其相对表达量分别为1.22±0.08、2.09±0.20、2.26±0.11、2.37±0.07,组间表达差异有统计学意义(F=75.37,P< 0.05).25 mmol/L组与对照组相比差异无统计学意义,其余各组均较对照组明显升高(P<0.01).结论 二甲双胍在体外能够显著抑制HaCaT细胞的增殖,可能通过下调miR-21-5p的表达,使其下游靶基因PDCD4表达上调,从而发挥抑制细胞增殖的作用.