黄独微型块茎胚性愈伤组织超低温保存及遗传稳定性研究

• 作者: 尹明华 洪森荣
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 黄独 微型块茎 胚性愈伤组织 小滴玻璃化法 超低温保存
• 年，卷（期）: 2015,（17）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2623-2631
• 分类号: Q942|R282
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.18.020

摘要

目的 对影响黄独Dioscorea bulbifera微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的多种因素进行探讨,并从形态学、生理学、DNA量以及光合特性参数和叶绿素荧光参数等方面对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测.方法 采用微型块茎及其胚性愈伤组织进行诱导,小滴玻璃化法超低温保存,通过检测包括总叶绿素量、可溶性蛋白量、可溶性总糖量以及超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性等植物生理指标,并采用流式细胞术的方法对遗传稳定性进行考察.结果 最佳的黄独微型块茎胚性愈伤组织超低温保存条件:室温下将黄独微型块茎胚性愈伤组织块转入MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L2,4-D+0.3 mol/L蔗糖的培养基中预培养ld.预培养后的胚性愈伤组织块在(25±1)℃下转入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖,pH 5.8)中处理20 min,再用100％ PVS2于0℃脱水40min.脱水后将材料转入铝箔条上的PVS2小滴中,液氮冰冻后迅速将材料转入冷冻管中(装满液氮).投入液氮罐保持ld后,取出铝箔条,浸入37℃洗涤液(MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L2,4-D+1.2 mol/L蔗糖,pH 5.8)中,胚性愈伤组织块脱落后,室温下再用新鲜洗涤液对其洗涤3次,每次10min.洗涤后的材料接入分化培养基(MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5g/L琼脂粉)中,暗培养2d后转到12 h/d的光周期中培养,细胞存活率达89％以上.黄独微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存后的再生苗与胚性愈伤组织常温再生苗在形态指标和生理指标等方面均无显著性差异(P＞0.05),两者的DNA量也未发生显著变化(P＞0.05).结论 建立了黄独微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的技术体系,其再生植株经检测无遗传变异,为薯蓣属植物种质资源的长期保存提供了理论依据和技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹明华	上饶师范学院生命科学学院	120	428	10.0	14.0
2	洪森荣	上饶师范学院生命科学学院	118	484	12.0	16.0