白介素10修饰的内皮祖细胞对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

• 作者: 孟祥达 张竹红 江枫 王颖 陈庆中 颜华
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病视网膜病变/病理生理学 白细胞介素10 干细胞 动物实验
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 575-580
• 页数: 6页
• 分类号: R774.1
• 字数: 5807字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.06.016

摘要

目的 观察白介素(IL)10修饰的内皮祖细胞(EPC)对糖尿病大鼠视网膜病变的影响.方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中提取并培养EPC,利用免疫荧光细胞化学染色法鉴定.取生长状态良好的EPC,每孔加入10μl慢病毒(LV)包装的IL10-绿色荧光蛋白(GFP)质粒(EPC-LV-IL10-GFP组)或LV包装的空白载体GFP质粒(EPC-LV-NC-GFP组),不加入任何质粒者作为EPC组.采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测量3组细胞培养基中肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL10、IL8和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.雄性Wistar大鼠168只分为正常对照组、糖尿病对照组、实验对照组及实验治疗组,分别为28、28、56、56只.后3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液建立糖尿病模型.建模成功后3个月,实验对照组、实验治疗组大鼠分别尾静脉注射EPC-LV-NC-GFP、EPC-LV-IL10-GFP;正常对照组、糖尿病对照组大鼠不给予任何干预.采用免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜中GFP的表达;视网膜荧光染色铺片和伊凡思蓝(EB)定量检测大鼠血视网膜屏障的破坏程度;透射电子显微镜观察大鼠视网膜病理组织学的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中VEGF、金属蛋白酶(MMP)-9、血管生成素(Ang)-1、一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达.结果 ELISA检测结果显示,与EPC组、EPC LV-NC GFP组比较,EPC-LV-IL10-GFP组细胞培养基中TNF-α、IL8浓度明显下降(F=28.910、14.242,P＜0.05);IL10、VEGF浓度明显升高(F=10.795、26.097,P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示,正常对照组、糖尿病对照组大鼠视网膜组织GFP表达呈阴性;实验对照组、实验治疗组大鼠视网膜组织GFP表达呈阳性,主要表达在神经节细胞层、内核层及外丛状层.组间大鼠视网膜血管病理改变及EB平均渗漏量比较,糖尿病对照组较正常对照组明显加重(P＜o.05),实验对照组及实验治疗组较糖尿病对照组明显减轻(P＜0.05),干预后2、4周实验治疗组较实验对照组明显减轻(P＜0.05).与正常对照组比较,糖尿病对照组大鼠视网膜VEGF、MMP-9、Ang-1、iNOS mRNA表达明显提高(P＜0.05),eNOS mRNA表达明显降低(P＜0.05).与糖尿病对照组比较,实验对照组、实验治疗组VEGF、iNOS mRNA表达明显降低,且以实验治疗组降低更为明显(P＜0.05),Ang-1、MMP-9 mRNA表达无明显变化(P＞0.05),eNOSmRNA表达明显提高,且以实验治疗组的提高最明显(P＜0.05).结论 IL10修饰的EPC通过改善视网膜炎性微环境可减轻糖尿病大鼠视网膜病变程度;外源性EPC植入可能弥补糖尿病视网膜病变发生后EPC数量相对不足的缺陷,加强治疗效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜华	天津医科大学总医院眼科	199	1067	16.0	22.0
2	陈庆中	天津医科大学总医院眼科	4	30	2.0	4.0
3	孟祥达	天津医科大学总医院眼科	7	15	2.0	3.0
4	江枫	天津医科大学总医院眼科	8	39	3.0	6.0
5	张竹红	天津医科大学总医院眼科	3	10	1.0	3.0
6	王颖		3	10	2.0	3.0