罗非鱼组织内无乳链球菌实时荧光定量 PCR 检测方法建立

• 作者: 李莉萍 梁万文 梁聪 王瑞 陈明 雷爱莹 黄婷
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 罗非鱼 无乳链球菌 实时荧光定量 PCR TaqMan 荧光探针
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: S943.125
• 字数: 4776字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.03.007

摘要

为建立一种罗非鱼组织内无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的定量检测方法，以无乳链球菌 cfb 基因为靶标建立了 TaqMan 荧光探针实时定量 PCR 方法，并对该方法的特异性、敏感性及实用性进行了验证。应用建立的方法检测无乳链球菌标准菌株和阳性菌株均为阳性，阴性对照菌株均为阴性；无乳链球菌基因组 DNA 最低检测质量浓度为3.42×10-7 ng·μL -1，每个反应体系检测下限低于10个细胞；人工感染罗非鱼肝、脾、中肠和肾组织样品无乳链球菌检测结果均为阳性，组织样品每微克 DNA 可检测到无乳链球菌细胞数量分别为2.95×103个、2.45×107个、2.34×103个和4.54×104个，对照组为阴性。结果表明建立的罗非鱼组织内无乳链球菌实时荧光定量 PCR 检测方法具有准确性高、特异性和敏感性强等特点，可对罗非鱼组织内无乳链球菌进行快速定量检测，可用于罗非鱼无乳链球菌病的监测与预防。