肽核酸钳制-PCR检测K-ras突变法的阳性判断阈值及检测下限的研究

• 作者: 丁佳寅 吴洪玉 李兆申 李泉江 满晓华 金晶 高军
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 关键词: K-ras基因 突变 肽核酸类 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 字数: 2783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.01.008

摘要

目的 确定肽核酸钳制-PCR(PNA-PCR)检测K-ras突变的阳性判断阈值(Cut off)和检测下限.方法 将含K-ras基因12或13密码子突变的胰腺癌细胞株PANC1、SW1990基因组DNA以不同的浓度分别与K-ras野生型的胎盘DNA混合配制成含不同突变率(0、0.1％、0.2％、0.4％、0.8％、1.6％、3.1％、6.25％、12.5％、25％、50％)的样本,并制备1％突变率PANC1细胞及30％突变率SW1990细胞DNA总量分别为50、20、5、1 ng和50、10、5、1 ng的样本.应用PNA-PCR方法检测样本中的K-ras基因12、13密码子突变,收集它们的突变Ct值、总体Ct值,并计算出△Ct值(突变Ct值-总体Ct值).实验重复10次.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析△Ct值,确定K-ras基因突变的最适Cutoff值,计算诊断阳性率及确定诊断下限.结果 所有不同突变率的PANC1细胞12密码子突变以及SW1990细胞13密码子突变的突变Ct值及△Ct值与阴性对照样本的差异均有统计学意义(P值均＜0.05),而总体Ct值与阴性对照样本的差异无统计学意义.诊断K-ras基因12密码子突变的ROC曲线下面积(AUC)为0.926,最适Cut off值为11,相应的敏感度和特异度为84％和100％,检出下限为0.4 ng;诊断K-ras基因13密码子突变的AUC为0.906,最适Cut off值为9.5,相应的敏感度和特异度为71％和100％,检测下限为1.5ng.固定突变率的检测结果进一步确定上述的检测下限.结论 成功确立了PNA-PCR法检测K-ras基因12、13密码子突变的Cut off值和检测下限,达到临床应用的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	吴洪玉	第二军医大学长海医院消化内科	26	35	3.0	3.0
3	满晓华	第二军医大学长海医院消化内科	92	537	10.0	19.0
4	高军	第二军医大学长海医院消化内科	91	287	9.0	10.0
5	金晶	第二军医大学长海医院消化内科	47	145	7.0	8.0
6	李泉江	第二军医大学长海医院消化内科	4	7	2.0	2.0
7	丁佳寅	第二军医大学长海医院消化内科	3	6	2.0	2.0