鱼腥草糖基转移酶基因UGT75C1的克隆及原核表达

• 作者: 付明 伍贤进 姚元枝 宁鹏飞 李昭君 魏麟 黎晓英
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鱼腥草 UGT75C1 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 2299-2305
• 分类号: S567.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0454

摘要

根据已经获得的鱼腥草UGT75C1转录本序列设计l对引物,采用RT-PCR方法获得UGT75C1基因cDNA序列,并对UGT75C1蛋白进行理化性质分析,并预测该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了UGT75C1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况,将克隆得到的UGT75C1基因完整开放阅读框连接到原核表达载体pGEX4T-1上,转化大肠杆菌E.coli BL21 (DE3),通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.克隆获得的UGT75C1基因长为1 787 bp,开放阅读框1 461 bp,编码486个氨基酸.生物信息学预测UGT75C1蛋白含跨膜区,不含信号肽,具有糖基转移酶的PSPG motif.UGT75C1在鱼腥草的叶片中表达丰度最高,其他器官中表达量相对较低,花中表达量最低;该基因原核表达产物与预期大小一致,显示原核表达成功,为下一步研究其功能奠定了基础.