氧化低密度脂蛋白通过 CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬

• 作者: 刘庆华 姚树桐 岳峰 李严严 杨娜娜 桑慧 田华 秦树存
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 自噬 氧化低密度脂蛋白 CD36 氧化应激 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: ? 论 著?
• 页码范围: 1002-1007
• 页数: 6页
• 分类号: R363.2|R332
• 字数: 4521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2015.06.007

摘要

目的：研究氧化低密度脂蛋白（ oxidized low－density lipoprotein，ox－LDL）对巨噬细胞自噬的诱导作用，并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264．7巨噬细胞，给予抗CD36单克隆抗体（2 mg／L）、二亚苯基碘鎓（diphenyleneiodonium，DPI；5μmol／L）、3－甲基腺嘌呤（3－methyladenine，3－MA；3 mmol／L）或雷帕霉素（1μmol／L）预处理1 h，再加入ox－LDL（100 mg／L）继续培养12 h。采用MTT法检测细胞活力，采用相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶（ lactic dehydrogenase，LDH）、细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nicotinamide adenine dinucleotide phos－phate，NADPH）氧化酶、超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase，SOD）活性以及活性氧簇（ reactive oxygen species， ROS）和丙二醛（ malondialdehyde，MDA）水平，以评价细胞膜完整性和氧化应激反应。采用免疫印迹技术检测自噬标志分子beclin－1和微管相关蛋白1轻链3－II（ microtubule－associated protein 1 light chain 3－II，LC3－II）表达变化。结果：ox－LDL诱导巨噬细胞自噬反应，表现为beclin－1和LC3－II上调；与自噬抑制剂3－MA相似，抗CD36单抗可显著抑制ox－LDL所诱导的LC3－II和beclin－1表达。抗CD36单抗明显抑制ox－LDL所诱导的氧化应激，包括抑制NAD－PH氧化酶活性和ROS、MDA水平以及升高SOD活性，其作用与NADPH氧化酶抑制剂DPI相似。另外，DPI显著抑制ox－LDL所诱导的beclin－1和LC3－II表达，且ox－LDL所诱导的细胞活力降低和LDH漏出可被3－MA促进并可被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。结论：ox－LDL可诱导巨噬细胞自噬，其机制可能与CD36介导ox－LDL摄取进而触发的氧化应激有关，且一定程度的自噬可减轻ox－LDL所诱导的巨噬细胞损伤。