核输入蛋白α/β真核表达载体的构建及细胞内定位

• 作者: 丁丽华 刘婕 周蕾 张亚楠 熊加秀 罗晓丽 贾晓蒙 陈志达 陈滢洁
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 核输入蛋白α/3 克隆 细胞定位
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 772-775
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3397字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.06.007

摘要

目的:构建带有myc标签的核输入蛋白(importin) α/β的真核表达载体,转染人胚肾293T细胞并分析其表达.方法:以乳腺癌文库为模板PCR扩增核输入蛋白α/β基因,扩增产物插入真核表达载体pXJ-40-myc,经双酶切和测序鉴定;将空载体与重组质粒分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和免疫荧光技术检测核输入蛋白α/β的表达.结果:酶切鉴定与测序结果表明构建的myc-Importin α/β真核表达载体正确;Western印迹检测到重组质粒在293T细胞中的表达;免疫荧光检测到核输入蛋白o定位于细胞质和细胞核,而核输入蛋白β定位于细胞核.结论:构建了核输入蛋白α/β的真核表达载体,并确定了其在细胞中的表达定位.