利用酵母双杂交系统筛选花生AhCaM相互作用蛋白

• 作者: 万书波 孟静静 张佳蕾 李新国 李燕 李萌 杨莎 郭峰
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 花生叶片cDNA文库 AhCaM 泛素 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子遗传学
• 页码范围: 1056-1063
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2015.01056

摘要

CaM是目前已知的胞内Ca2+受体蛋白中最重要的一种,参与多种生理活动的调节。为深入研究CaM蛋白的作用机制,探索其在花生钙信号途径中的作用靶点,用花生 CaM 基因构建了既无自激活性又无毒性的pGBKT7-AhCaM诱饵表达载体；同时从花生叶片组织中提取总RNA,分离得到mRNA,利用SMART技术合成并纯化双链 cDNA 后建立花生叶片 cDNA 文库；通过共转化法筛选与 CaM 相互作用的蛋白,并对阳性克隆分析和鉴定,筛选到5个与 AhCaM 互作的蛋白,其中 NAD 激酶是已知能与钙调素互作的蛋白；而泛素能与 AhCaM 互作,说明AhCaM 在花生发育及抗逆方面起作用。通过分析这些靶蛋白的已知功能,为研究 AhCaM 的未知生物学功能提供了重要信息。