转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建

• 作者: 侯继波 卢宇 徐海 王义伟 许梦薇 鲍熹
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 DNA疫苗 真核表达 T7噬菌体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 117-121
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.48
• 字数: 3983字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.01.018

摘要

为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达.以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒pUC-L-EEB-R.将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体.提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达.结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入.T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录.表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯继波	江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心	66	346	10.0	16.0