稳定表达EGFP-LC3的AR42J细胞系的建立

• 作者: 刘晓 吴敏 李洁 李钦芳 湛先保 郭晓榕
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 关键词: 慢病毒感染 自噬 细胞系 AR42J细胞
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 112-115
• 页数: 4页
• 字数: 3124字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.011

摘要

目的 建立稳定表达增强型GFP (EGFP)-LC3的AR42J细胞.方法 利用慢病毒过表达载体Lentiviral-EGFP-LC3包装成慢病毒,感染大鼠胰腺腺泡细胞AR42J.以Lentiviral-EGFP感染作为阴性对照.通过倒置荧光显微镜观察及流式细胞分析仪检测病毒感染效率,蛋白质印迹法检测稳定传代细胞株的LC3蛋白表达.用毒胡萝卜素处理细胞建立内质网应激模型,采用蛋白质印迹法检测应激的AR42J细胞的LC3、PERK蛋白表达.结果 AR42J细胞的Lentiviral-EGFP-LC3感染效率＞85％,并能稳定传代.Lentiviral-EGFP-LC3感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的(9.14±0.32)倍;LC3蛋白阳性表达并有EGFP-LC3融合蛋白的表达.Lentiviral-EGFP感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的(1.08 ±0.07)倍,无LC3蛋白表达,仅有GFP表达.与未感染组比较,EGFP-LC3组的LC3 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而EGFP组的差异无统计学意义.结论 成功构建了稳定表达EGFP-LC3的大鼠胰腺外分泌细胞AR42J,为进一步研究急性胰腺炎与自噬的关系提供了新的细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	湛先保	第二军医大学长海医院消化内科	91	748	15.0	22.0
2	李洁	第二军医大学长海医院消化内科	13	37	4.0	5.0
3	郭晓榕	第二军医大学长海医院消化内科	5	26	3.0	5.0
4	刘晓	第二军医大学长海医院消化内科	10	21	2.0	4.0
5	吴敏	第二军医大学长海医院消化内科	3	5	1.0	2.0
6	李钦芳	第二军医大学长海医院消化内科	4	13	2.0	3.0