水稻DEAD-box RNA解旋酶OsRH37超表达和RNAi转基因水稻的获得及其亚细胞定位分析

• 作者: 丁作美 吴建国 吴祖建 张超 李阳 杨振 郑璐平 高芳銮
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: DEAD-box RNA解旋酶(RH) OsRH37 超表达 RNAi 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1410-1420
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.11.002

摘要

DEAD-box RNA解旋酶(RNA helicase,RH)普遍存在于绝大多数的生物体中,参与到RNA新陈代谢的各个方面.本研究从日本晴水稻(Oryza sativa L.japonica.cv.Nipponbare)叶片RNA中成功克隆DEAD-box RNA解旋酶基因OsRH37的CDS全长序列.序列比对发现,OsRH37的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana) DEAD-box RNA解旋酶17、37和52的氨基酸序列一致性＞70％,与来自于不同动物体内DEAD-box RNA解旋酶的氨基酸序列一致性普遍＜60％.构建了OsRH37的水稻超表达和RNAi干扰载体,通过水稻遗传转化体系成功转化水稻获得OsRH37超表达和RNAi T0转基因水稻阳性植株.sqRT-PCR分析表明,与野生型日本晴水稻中OsRH37表达量相比,OsRH37超表达T1转基因水稻中OsRH37表达量均明显上调,而OsRH37 RNAi转基因水稻中OsRH37的表达量均显著下调.构建青色荧光蛋白的瞬时表达载体CFP-OsRH37,经农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种导入本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片表皮细胞,激光共聚焦显微观察结果显示,OsRH37蛋白定位于细胞核、染色质核仁和细胞质中的点状结构.OsRH37的生物信息学分析、超表达和RNAi转基因水稻的获得以及亚细胞定位分析将为研究其在水稻生长发育和胁迫反应中发挥的重要作用提供线索.