边界病病毒E2蛋白质的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘霞 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 魏建忠
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 边界病病毒 E2蛋白质 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 93-99
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.4
• 字数: 5066字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.01.014

摘要

边界病病毒(Border disease virus,BDV)是导致绵羊和山羊繁殖障碍的重要病原.为了建立检测BDV特异抗体的ELISA方法,本研究将BDV基因克隆入原核表达载体pET-32a(+),并构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白质.以纯化的重组表达蛋白质为抗原,建立间接ELISA(rE2-ELISA)检测方法.通过反应条件优化,确定抗原包被浓度4.0 μg/ml;封闭液为20 g/L BSA;血清最佳稀释度为1∶50,孵育1h;二抗最佳稀释倍数为1∶30 000,作用45 min;以TMB为底物显色10 min.用该ELISA方法检测瘟病毒属的CSFV、BVDV阳性血清,结果均为阴性.对187份山羊血清样品进行临床检测,与Svanova试剂盒检测结果阳性符合率为76.25％, 总符合率为74.87％;上述检测方法同时与Western blot鉴定结果进行比较,结果显示,Western blot结果与rE2-ELISA检测结果的符合率为79.55％,高于与Svanova试剂盒检测的符合率(72.73％).表明建立的间接ELISA检测方法可适用于临床BDV血清样品的抗体检测.