人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测

• 作者: 何景华 尹洁 李杨 王玺 罗琦 黄珊
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 胎血 造血干细胞 杀伤细胞,天然 免疫表型分型 细胞毒性试验,免疫 CD34+HSCs 体外分化 细胞杀伤
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 225-228
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2015.03.001

摘要

目的：检测人脐带血造血干细胞（HSCs）体外分化为自然杀伤（NK）细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs，接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体（Flt3L）、干细胞生长因子（SCF）、白细胞介素（IL）-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中，定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态，在分化的第7、14、21及28天，采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化；分化的第21、28天，以分化得到细胞为效应细胞，K562细胞作为靶细胞，设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶14组效靶细胞比，分别采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法，检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖；整个分化进程的不同阶段中，CD3和CD19表达量差异无统计学意义，CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加，最高达（72.57±1.60）%、（32.83±1.29）%和（29.53±2.40）%，CD34的表达量逐渐降低，最低为（12.13±2.01）%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达（49.91±2.76）%和（40.87±1.12）%，8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低（P<0.05），诱导分化28 d的NK细胞杀伤能力与21 d差异无统计学意义。结论人脐带血HSCs在体外适宜的培养条件下，可定向分化为NK细胞，诱导分化得到的NK细胞具有杀伤功能。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何景华	天津医科大学基础医学院	22	236	6.0	15.0
2	罗琦	天津医科大学基础医学院	2	5	2.0	2.0
3	尹洁	天津医科大学细胞生物学系	6	9	2.0	2.0
4	李杨	天津医科大学细胞生物学系	17	127	6.0	11.0
5	黄珊	天津医科大学细胞生物学系	4	7	2.0	2.0
6	王玺	天津医科大学细胞生物学系	8	16	2.0	3.0