超顺磁性氧化铁-短发夹 RNA 双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度

• 作者: 吴晓凤 文明 文曦琳 李妹玲 李少林 李易 葛晓东 邓小林
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 细胞系,肿瘤 分子探针 卵巢肿瘤 RNA干扰 SKOV3细胞
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 754-760
• 页数: 7页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2015.05.005

摘要

目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁-短发夹RNA（ superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA ， SPIO-ShRNA）分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞，观察细胞形态，检测细胞的生物学行为，寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg／L的探针转染SKOV3细胞后，采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况，普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒，原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量，cell counting kit-8（CCK-8）检测细胞活性，流式细胞术观察细胞凋亡，Western blot 检测细胞内表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）蛋白的表达，磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）检测细胞内信号强度变化。结果：在5～30 mg／L铁浓度范围内，细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大，当探针铁浓度为45 mg／L时，进入细胞达到饱和，标记率接近100％；细胞活性随探针质量浓度的增加而降低，各实验组细胞活性分别为94．626％±1．050％、93．373％±1．180％、91．700％±3．122％、75．100％±4．362％、72．983％±3．233％、71．010％±2．910％，5、15、30 mg／L组细胞活性未见明显下降，差异无统计学意义（P＝0．475，P＝0．226，P＝0．068）；≥45 mg／L细胞活性明显下降（P＜0．001）；探针浓度≥45 mg／L时，探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加，45 mg／L组蛋白表达率为68．905％±3．510％，与5、15、30 mg／L组相比差异具有统计学意义（ P＜0．001，P＝0．001，P＝0．003， P均＜0．01）；MRI显示随着探针质量浓度增加，细胞信号强度逐渐降低，45 mg／L组细胞信号强度为165．55±4．92，信号强度明显降低，45 mg／L组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌SKOV3细胞）、5、15、30 mg／L各组信号强度相比，差异均有统计学意义（P均＜0．001）。结论：当SPIO-ShRNA分子探针铁浓度为45 mg／L时，可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达，能被MRI所检测，初步证实具有诊断与治疗的双重作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文明	重庆医科大学附属第一医院放射科	85	321	8.0	14.0
2	邓小林	重庆医科大学附属第一医院放射科	7	13	2.0	3.0
3	吴晓凤	重庆医科大学附属第一医院放射科	9	13	2.0	3.0
4	李妹玲	重庆医科大学附属第一医院放射科	10	34	4.0	5.0
5	李易	重庆医科大学附属第一医院放射科	7	27	3.0	5.0
6	葛晓东	重庆医科大学附属第一医院放射科	6	27	4.0	5.0
7	文曦琳	重庆医科大学附属第一医院放射科	5	24	3.0	4.0