恶臭假单胞菌HspB的单晶培养及结晶条件优化

• 作者: 吴更 唐鸿志 许平 邬志杰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 恶臭假单胞菌 尼古丁代谢 单加氧酶 定点突变 结晶
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 236-242
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.11.031

摘要

为了获得可用于X射线衍射的恶臭假单胞菌尼古丁代谢途径中关键单加氧酶HspB的单晶。定点突变PCR构建重组质粒，大肠杆菌中诱导表达，镍柱亲和层析、烟草蚀纹病毒（Tobacco etch virus，TEV）蛋白酶酶切和凝胶过滤层析纯化，悬滴扩散法进行结晶。成功构建重组质粒并获得高表达；比较了TEV蛋白酶柱上及透析酶切的效率，TEV蛋白酶透析酶切效率更高；确定了该纯化路线，获得电泳纯级的HspB蛋白。结晶条件初筛和正交优化后获得可培养HspB蛋白单晶的条件为22% PEG3350、0.1 mol/L Bis-Tris pH6.5、0.21 mol/L MgCl2、18℃、150比例加晶种。去除标签后的HspB蛋白获得了分辨率1.8?的单晶。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴更	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	14	11	2.0	3.0
2	许平	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	33	249	10.0	15.0
3	唐鸿志	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	18	105	6.0	10.0
4	邬志杰	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	1	0	0.0	0.0