转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌的构建及其肉鸡饲喂效果验证

• 作者: 曹平华 杨明明 杨雨鑫 王磊 蔡蓓 袁超 陈玉林 高印 高康
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 转基因 内切葡聚糖酶基因 罗伊乳酸杆菌 饲喂效果 肉鸡
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 动物营养
• 页码范围: 774-783
• 页数: 10页
• 分类号: S831|S815.5
• 字数: 7006字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.013

摘要

本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶,且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌,并对其进行肉鸡饲喂效果验证,为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础.采用PCR和酶切连接方法构建pLEM4157(cel)载体,转化Lactobacillus.reuteri XC1感受态细胞,进行聚丙烯胺凝胶电泳表达谱分析和内切葡聚糖酶活性测定,同时测定其肉鸡饲喂效果.结果表明,克隆的内切葡聚糖酶基因大小为1 500 bp,经测序比对,与已报道基因序列相似性为99％,氨基酸序列相似性为100％;Native-PAGE和SDS-PAGE分析结果表明,内切葡聚糖酶基因celW成熟肽在罗伊乳酸杆菌的蛋白分子量均为52 ku左右,与理论计算值相符;L.reuteri pLEM4157(cel)培养上清和胞内上清内切葡聚糖酶活性分别为(0.96±0.08)和(0.37±0.09)U·mL-1;L.reuteri pLEM4157(cel)对肉仔鸡生长性能无显著影响,但可显著降低21日龄肉仔鸡十二指肠、空肠pH,促进21日龄肉仔鸡肾、法氏囊、胸腺和胰腺的生长发育,增加42日龄肉仔鸡的胸腺和胰腺指数,提高肉仔鸡21日龄血清白球比、钙、磷含量和42日龄血清葡萄糖含量.L.reuteri pLEM4157(cel)成功分泌表达了内切葡聚糖酶,具有降解羧甲基纤维素的能力和一定的肉鸡饲喂效果.