用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物分子量检测的SEC-RI-MALS联用方法的建立及验证

• 作者: 朱涛 李璐 杨丽霞 汪竹 董建芹 邵忠琦
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 化学
• 关键词: SEC-RI-MALS联用 dn/dc值 ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗 多糖-CRM197结合物 分子量
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 841-847
• 分类号: R378.1+5|O657.3
• 语种: 中文

摘要

目的 建立分子筛层析(size exclusion chromatography,SEC)-示差检测(refractive index,RI)-多角度激光光散射(multi-angle laser light scattering,MALS)联用方法检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物的分子量,并对方法进行验证.方法 首先单机测定ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中各血清群多糖-CRM97结合物的dn/dc值(折射率增量),再采用SEC-RI-MALS联用技术,以0.9％ NaC1为流动相,TSKgel G5000PWxl为色谱柱,在流速0.4 ml/min的条件下,对结合物的分子量进行测定.对方法的重复性和日间精密性进行验证,并通过对样品进行高温或冻融处理,分析SEC-RI-MALS法在监测分子量变化上的应用.结果 各血清群多糖-CRM197结合物的高、中、低浓度样品平行测定3次重均分子量的相对标准偏差(RSD)均小于10％,不同浓度下测定的分子量大小无显著差异,其分子量分布曲线重合性好;连续5日检测各血清群多糖-CRM197结合物分子量的RSD值均小于10％,其分子量分布曲线重合性好.经沸水浴处理,各血清群多糖-CRM 197结合物的分子量分布情况均发生了明显的变化;冻融处理对A、C群多糖-CRM197结合物的分子量无太明显的影响,W135和Y群多糖-CRM197结合物在冻融过程中出现了一定的分子聚集现象.结论 建立的SEC-RI-MALS联用测定多糖-CRM197结合物分子量的方法具有良好的重复性和日间精密性,能够用于ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中结合物分子量的检测,并可对结合物在不同保存条件下的稳定性进行监测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李璐	南开大学药学院	6	3	1.0	1.0
2	朱涛	天津科技大学生物工程学院	16	16	2.0	2.0
3	邵忠琦	天津康希诺生物技术有限公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室	5	7	2.0	2.0
4	杨丽霞	天津康希诺生物技术有限公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	汪竹	天津康希诺生物技术有限公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室	2	1	1.0	1.0
6	董建芹	天津康希诺生物技术有限公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室	1	0	0.0	0.0