中国小麦花叶病毒 CP 和 CRP 蛋白的原核表达、抗血清制备及 RNA2侵染性克隆构建

• 作者: 于金凤 唐伟 孔凡惠 李向东 田延平 脱建波 迟胜起 魏娇
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中国小麦花叶病毒 衣壳蛋白(CP) 富含半胱氨酸蛋白(CRP) 抗血清制备 侵染性克隆
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术?遗传育种?种质资源
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: S188+S435.121.4
• 字数: 3421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2015.08.002

摘要

中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus，CWMV）引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了 CWMV 烟台分离物的衣壳蛋白（Coat protein，CP）及富含半胱氨酸蛋白（Cyste-ine －rich protein，CRP）基因，并将其连接到原核表达载体 pEHISTEV，转化大肠杆菌 Rosetta。经 IPTG 诱导，表达出分子量均为19 kD 的 CP 和 CRP。将二者从凝胶中切下，乳化后免疫新西兰大耳兔4次，获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA 检测表明，CWMV CP 和 CRP 抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot 分析证明该抗血清只与感染 CWMV 的小麦有特异性反应，而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含 T3启动子的引物通过 RT －PCR 扩增出 CWMV RNA2全长片段，经 T／A 克隆连接到 pMD18－T，获得质粒 pMD18－T －CWMV －RNA2。该质粒经 Xba Ⅰ线性化后，利用 T3 RNA 聚合酶进行体外转录，转录产物摩擦接种本氏烟，15℃培养3天后，利用 Western blot 可从接种叶片中检测到瞬时表达的 CWMV CP 蛋白。