关岭牛MyoD Ⅰ基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达

• 作者: 周迪 夏丹 张雯 桓聪聪 许厚强 赵佳福 陈伟 陈祥
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: MyoD Ⅰ 真核表达载体 C2C12细胞 启动子 基因表达量
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 719-727
• 页数: 9页
• 分类号: S823|S813.3
• 字数: 6190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.006

摘要

本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD Ⅰ启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置.采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD Ⅰ基因的相对表达量进行检测.以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD Ⅰ启动子,定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区,构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD Ⅰ.利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞,依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD Ⅰ启动子的启动活性.结果显示,MyoD Ⅰ基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高;目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区;重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达,细胞在激发光下发绿色荧光.本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD Ⅰ,4个启动子均具有启动活性,其中P3启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高,初步推断P3启动子为该基因的核心启动子.