tRNA抑制子对转录因子NKX2.5提前终止密码子的通读

• 作者: 倪倩 刘亚萍 刘远航 吴柱国 宋仁生 李涛 欧阳平 黄志刚 齐小娟
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: tRNA抑制子 NKX2.5 提前终止密码子 通读 先天性心脏病
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 367-373
• 页数: 7页
• 字数: 4260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.14-410

摘要

人类NKX2.5基因(NK2 homeobox 5，NKX2.5)提前终止密码子(Premature termination codon，PTC)突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前，已报道的NKX2.5 PTC突变有8个(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X)。为了检测tRNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白，文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pcDNA3.1(-)载体，将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到pEGFP-N1载体，形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的tRNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断tRNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 mRNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明，文章成功构建了8个基于pcDNA3.1(-)的NKX2.5表达质粒、4个基于pEGFP-N1的质粒；tRNA抑制子tRNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X，且对后三者的通读效率均在50%以上；tRNA op能有效通读C264X，通读效率约50%左右；tRNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变；各通读后样本Cx43 mRNA相对表达量增加7%~41.7%；tRNA am和tRNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变，产生具有功能的全长蛋白，但tRNA抑制子对细胞的其他影响还不明确，有待于进一步观察。