筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株

• 作者: 孙静 张桂荣 王虹月 申慧
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 关键词: 肺肿瘤 羧肽酶E N端截短体 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 340-344
• 页数: 5页
• 字数: 3075字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2015.06.03

摘要

背景与目的 N端截短的羧肽酶E（N-terminal truncated carboxypeptidase E, CPEΔN）是一个新的肿瘤转移相关蛋白。本研究旨在筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株，为完成小鼠活体成像实验创造条件。方法构建CPEΔN的慢病毒表达载体。分别用CPEΔN慢病毒表达载体或对照慢病毒空载体转染H1299细胞，2μg/mL的嘌呤霉素加压筛选。Western blot分析CPEΔN蛋白的表达，荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶对底物的分解作用。结果当感染倍数（multiple of infection, MOI）是20时，慢病毒对H1299细胞的转染效率可以达到80%。CPEΔN高表达H1299细胞株（H1299-CPEΔN）和对照慢病毒载体表达H1299细胞株（H1299-control）中CPEΔN蛋白的表达量为4：1。H1299-CPEΔN和H1299-control均能够有效分解荧光素酶底物，可以满足活体成像实验的需求。结论筛选出高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株，为活体成像实验的开展创造了条件，也为进一步解释CPEΔN促进肿瘤转移的分子机制奠定了基础。