苦参碱体外对人髓母细胞瘤 D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用

• 作者: 吉海龙 周开宇 毛天明 白志强
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 苦参碱 细胞增殖 细胞凋亡 自噬
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 240-246
• 页数: 7页
• 分类号: R979.1
• 字数: 3793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2015.02.009

摘要

目的：探讨苦参碱在体外诱导人髓母细胞瘤 D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用。方法体外培养细胞,随机分为对照组、苦参碱0.5,1.0,1.5和2.0 g??L-1组,作用时间为24,48和72 h。 CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞结构,Western蛋白质印迹法检测细胞 Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Bcl-2同源结构域蛋白抗体beclin1蛋白表达。随后在苦参碱作用前1 h 加入终浓度为5 mmol??L-1的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察细胞beclin1和 LC3蛋白表达的变化。结果苦参碱0.5～2.0 g??L-1能明显抑制 D341细胞增殖,具有浓度效应关系(r24 h ＝0.994,r48 h ＝0.992,r72 h ＝0.996,P<0.01),而且可诱导 D341细胞凋亡( r24 h ＝0.937,r48 h ＝0.947,r72 h ＝0.987,P<0.01)；苦参碱浓度为2.0 g??L-1时,对 D341细胞增殖的抑制作用(r＝0.999,P<0.01)和凋亡的诱导作用(r＝0.990,P<0.01)具有时间效应关系。透射电镜观察发现,苦参碱2.0 g??L-1作用24 h, D341细胞出现气穴样的空泡结构,细胞染色质浓缩、边缘化；作用48 h,细胞核染色质浓缩明显,细胞胞浆中可见空泡；作用72 h,细胞核固缩明显,部分细胞可见核裂解,空泡明显增大。 Western蛋白质印迹法实验结果表明,苦参碱0.5～2.0 g??L-1增强 D341细胞 Bax 蛋白表达( r24 h ＝0.981,r48 h ＝0.967,r72 h ＝0.998, P<0.01),抑制 Bcl-2蛋白表达(r24 h ＝-0.977,r48 h ＝-0.989, r72 h ＝-0.968,P<0.01)。苦参碱作用48 h 可增强 D341细胞胱天蛋白酶3的表达(r48 h ＝0.995,P<0.01),作用24,48和72 h能增强 D341细胞 beclin1蛋白的表达,具有浓度效应关系(r24 h ＝0.989,r48 h ＝0.986,r72 h ＝0.966,P<0.01),自噬抑制剂3-MA 可抑制此作用(P<0.05)。苦参碱能使 D341细胞 LC3-Ⅰ蛋白表达减少,LC3-Ⅱ表达增加, LC3-Ⅰ/ LC3-Ⅱ比值降低(r24 h ＝-0.795,r48 h ＝-0.886,r72 h ＝-0.901,P<0.05)；自噬抑制剂3-MA 可抑制苦参碱对 LC3-Ⅰ和 LC3-Ⅱ蛋白表达的影响(P<0.05)。结论苦参碱体外具有抑制 D341细胞增殖、诱导凋亡和促进自噬的作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吉海龙	温州医科大学附属第一临床学院	4	14	2.0	3.0