shRNA干扰DNA甲基转移酶1表达沉默可抑制人食管鳞状细胞癌KYSE30细胞的增殖并诱导凋亡

• 作者: 刘吉勇 刘瑾 王京 赵淑磊
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 食管肿瘤 甲基转移酶类 RNA,小分子干扰 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1216-1221
• 页数: 6页
• 分类号: R735.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2015.11.517

摘要

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因表达沉默对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC) KYSE30细胞增殖和凋亡的影响.方法:设计并构建携带有特异性针对DNMT1基因的DNMT1-shRNA及阴性对照-shRNA重组载体.采用脂质体法将各shRNAs转染至KYSE30细胞中,通过嘌呤霉素来筛选稳定转染的细胞株;蛋白质印迹法检测各转染组细胞中DNMT1蛋白的表达情况;RT-PCR法检测KYSE30细胞中DNMT1基因沉默后对抑癌基因视黄酸受体β(retinoic acid receptor beta,RARβ)mRNA表达水平的影响;MTT法检测DNMT1基因沉默后对KYSE30细胞增殖的影响;FCM法检测对细胞凋亡的影响.结果:筛选获得稳定转染至KYSE30细胞且干扰效果最好的DNMT1-shRNA2;蛋白质印迹法显示DNMT1-shRNA2能够显著抑制KYSE30细胞中DNMT1蛋白的表达;同时RT-PCR检测发现,采用DNMT1shRNA2干扰DNMT1的表达后能使抑癌基因RARβ mRNA重新表达;并且,KYSE30细胞增殖能力下降,凋亡率增加(P值均＜0.01).结论:DNMT1基因表达沉默能够诱导KYSE30细胞中抑癌基因RARβ的重新表达,这可能是抑制KYSE30细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡的主要作用机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘吉勇		27	251	8.0	15.0
2	赵淑磊		3	5	2.0	2.0
3	王京		11	48	4.0	6.0
4	刘瑾		9	31	4.0	5.0