基于上转发光免疫层析技术的鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌快速检测方法研究与对比评价

• 作者: 刘晓 周蕾 孙崇云 张平平 李春凤 杨瑞馥 王成彬 王晓英 赵勇
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 耶尔森菌,鼠疫 芽孢杆菌,炭疽 布鲁杆菌属 上转发光技术 免疫层析
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 鼠疫
• 页码范围: 3-8
• 页数: 6页
• 字数: 4591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2015.01.002

摘要

目的 研制基于上转发光免疫层析技术(UPT-LF)检测鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸,与BioThreat Alert(R)免疫层析(BTA)试纸的检测和操作性能进行对比.方法 以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物,采用双抗体夹心模式分别研制检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的UPT-LF试纸.分别配制1010、109、108、107、106、105、0 CFU/ml系列浓度的鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌标准品以及109 CFU/ml系列浓度的27种特异性评价菌株菌液,采用UPT-LF试纸对其进行检测,对3种UPT-LF试纸的敏感性、精密性、线性和特异性进行分析评价.配制模拟阳性样品,分别采用UPT-LF和BTA试纸对107、106、105、0 CFU/ml系列浓度的标准品以及模拟阳性样品进行检测,比较UPT-LF和BTA试纸的检测时间、敏感性以及鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的检出率.结果 鼠疫菌UPT-LF、炭疽杆菌芽孢UPT-LF、布鲁菌UPT-LF试纸的敏感性均达到105 CFU/ml,各系列浓度检测带信号/质控带信号(T/C)值的变异系数均≤15％,lg[T/C值-临界值(cut-off值)]与lg(标准品浓度)的相关系数分别为0.996、0.998、0.999(F=1 647.57、743.51、1 822.17,P值均＜0.001).鼠疫菌UPT-LF和布鲁菌UPT-LF试纸检测特异性评价菌株时,均无非特异性交叉反应,炭疽杆菌芽孢UPT-LF试纸检测枯草芽孢杆菌分离株2#芽孢、蜡样芽孢杆菌分离株l#芽孢存在非特异交叉反应,检测其他特异性评价菌株均无非特异性交叉反应.UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌样品的时间分别为33、36、37 min,BTA为115、115、111 min;UPT-LF和BTA试纸检测0 CFU/ml标准品的阴性率均为5/5;UPT-LF试纸检测炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的敏感性均达到l05 CFU/ml,BTA试纸分别为106、106、105 CFU/ml;模拟样品检测中,UPT-LF试纸炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的检出率均为16/16,BTA试纸分别为7/16、16/16、16/16.结论 UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的敏感性较高,特异性、线性和精密性较佳,检测和操作性能较BTA试纸更为优良.