青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用

• 作者: 倪军 冯娟 崔亚婷 申亚阳 许海东 郭志勋 马红玲
• 来源期刊: 广东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 拟穴青蟹 青蟹双顺反子病毒-1 地高辛核酸探针 原位杂交
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 130-134,封3
• 页数: 6页
• 分类号: S945.6|Q819
• 字数: 4880字
• 语种: 中文

摘要

根据青蟹双顺反子病毒-1 (mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的cDNA片段.纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(AbSV)、类疱疹病毒(AbHV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性的检测出MCDV-1,检出MCDV-1的灵敏度为8.58×107 copies/μL.采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV-1的组织分布,结果表明,拟穴青蟹中MCDV-1 RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管.