反相色谱检测CpG ODN纯度方法的建立

• 作者: 何丽芳 何建东 吴凯 唐业峰 杨华智 王丽丽 赵志宏 钱雯 马波
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 化学
• 关键词: 高效液湘色谱 毛细管凝胶电泳 CpG ODN 核苷酸 纯度 线性回归 精密度 回收率
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 335-339
• 页数: 5页
• 分类号: O657.7
• 语种: 中文

摘要

CpG ODN是以非甲基化CpG为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用.近年来,CpG ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究.CpG ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序列纯度降低.因此,文章建立了一种反相色谱法对合成后的序列进行检定.通过采用反向层析色谱C18柱,甲醇-六氟异丙醇溶液为流动相,线性梯度洗脱,体积流量为0.25 mL/min,检测波长为260 nm,柱温60℃,进样量5μL,获得了精确度较高的检定结果.之后,对比了毛细管凝胶电泳及反相色谱分别对杂质序列的检测结果,发现反相色谱的检测结果更优,分离度达1.4以上,而毛细管电泳法无法有效检定n-1序列.此外,该方法进行了方法学的验证,在16.5 ～ 660 μg/mL浓度范围内线性良好,R2=0.991 2.回收率为98.7％,进行了6个批次样品的精密度与重现性检定,检定结果良好,RSD≤5％.因此文章所述纯度检定方法效果较佳,精密度及准确度更高,适合于CpG ODN序列的纯度检测,为核酸序列在未来的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马波		33	76	6.0	7.0
2	钱雯		19	30	4.0	5.0
3	何丽芳		8	20	3.0	4.0
4	王丽丽		12	7	2.0	2.0
5	何建东		4	6	1.0	2.0
6	唐业峰		3	0	0.0	0.0
7	吴凯		7	27	3.0	5.0
8	赵志宏		4	2	1.0	1.0
9	杨华智		1	0	0.0	0.0