耐有机溶剂果糖苷酶的胞外表达、纯化和结晶

• 作者: 何冰芳 苏汇 陈琼珍
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 果糖苷酶 pelB信号肽 胞外表达 蛋白纯化 结晶
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础微生物
• 页码范围: 2126-2132
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150035

摘要

[目的]克隆表达一种Arthrobacter arilaitensis NJEM01来源的耐有机溶剂β-呋喃果糖苷酶(β-FFase),纯化并进行结晶条件的研究.[方法]构建pelB信号肽与β-FFase融合表达质粒pET22b-pelB-bff,将其导入Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达,硫酸铵沉淀、DEAE阴离子交换色谱两步纯化重组蛋白,采用坐滴式气相扩散法对β-FFase进行结晶条件筛选和优化.[结果]构建重组质粒pET22b-pelB-bff,通过优化诱导表达条件,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导温度30℃,诱导时间10h,比活力高达108 U/mg,实现了果糖苷酶的胞外可溶性表达,纯化获得达到结晶纯度的β-FFase.结晶条件初筛和优化后获得可培养β-FFase晶体的条件为0.15 mol/L氯化钙,0.1 mol/L HEPES pH 6.7,26％聚乙二醇400.晶体衍射分辨率可以达到2.1(A).[结论]高糖苷合成能力β-FFase表达纯化体系的构建和结晶条件的初步研究,为从结构生物学角度进一步研究果糖苷酶结构与功能的关系,定向进化提高糖苷酶转糖基活性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何冰芳	南京工业大学药学院	91	785	14.0	24.0
2	苏汇	南京工业大学药学院	1	2	1.0	1.0
3	陈琼珍	南京农业大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0