潜伏相关抗原UL138蛋白的制备及其用于人巨细胞病毒感染血清学检测的评价

• 作者: 林刻智 沈贤 薛向阳 谢旺凯 郭刚强 陈文静 陈静 黄崇安
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人巨细胞病毒 UL138蛋白 血清学检测 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 703-708
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4998字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2015.10.001

摘要

目的：探讨基于人巨细胞病毒（HCMV）潜伏相关抗原UL138蛋白的ELISA方法用于HCMV感染血清学检测的意义。方法：生物信息学分析HCMVUL138蛋白的跨膜区结构，选择胞内区序列，经原核密码子优化后全基因合成，克隆至pET21a（+）原核载体，将成功构建的重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3），诱导蛋白表达后，SDS-PAGE及Westernblot法鉴定目的蛋白表达，采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的UL138蛋白包被ELISA板，检测173例人血清UL138特异性抗体，并与临床上使用的罗氏公司cobas8000分析系统及配套试剂盒进行血清HCMVIgG抗体检测比较，评价UL138蛋白作为HCMV感染血清学检测工具的效能。结果：利用原核表达系统成功表达了UL138蛋白，经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白；健康成人血清UL138特异性抗体的ELISA法检测结果显示，几乎所有的健康成人都存在UL138特异性抗体，与罗氏公司的化学发光（CLIA）法IgG检测结果比较，灵敏性为100.0%，符合率为98.8%，差异无统计学意义（x2=0.5， P＞0.05），而且具有较好的一致性（Kappa=0.496，P＜0.001）。结论：潜伏相关抗原UL138是HCMV感染血清学检测重要候选抗原，可望为基于此蛋白的HCMV血清学检测试剂的研制提供依据。