DNA-PKcs在DNA双链断裂应答过程中对H2AX磷酸化起主导作用

• 作者: 厉红元 李明 程巧 罗鑫荣
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: DNA双链断裂 H2AX磷酸化 DNA-PKcs
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-33
• 分类号: R394-33|R394.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.201407175

摘要

目的 研究在DNA双链断裂(double strand break,DSB)情况下,DNA-PKcs和ATM在磷酸化H2AX中所发挥的作用.方法 在HeLa细胞中,以高效的DNA双链断裂诱导剂新制癌菌素(neocarzinostatin,Ncs)诱导DSB形成,Western blot分析H2AX磷酸化的时间,剂量依赖及其去磷酸化的动态变化.DNA-PKcs抑制剂NU7026及ATM抑制剂Ku55933分别作用细胞,Western blot检测其对H2AX磷酸化的影响.以α-satellite序列为对象,γ-H2AX CHIP检测DNA-PKcs或ATM抑制前后H2AX磷酸化情况,得出定量数据.结果 γ-H2AX生成呈Ncs作用时间及剂量依赖过程.Ncs短时间作用后,γ-H2AX能够去磷酸化恢复.抑制DNA-PKcs明显影响γ-H2AX生成,而抑制ATM使得γ-H2AX生成高峰延迟.CHIP显示抑制DNA-PKcs后其DNA富集倍数仅为抑制前的27％,而抑制ATM后其富集倍数为抑制前的63％.结论 DNA-PKcs可能在DNA双链断裂应答过程中对H2AX磷酸化起主导作用.