过表达缺氧诱导因子-1α的结直肠癌裸鼠可视化模型的建立

• 作者: 叶小磊 房林 李喆 杨生生 殷佩浩 胡送娇 陈磊
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠癌 移植瘤模型 稳定转染 慢病毒 缺氧诱导因子-1α 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 246-251
• 分类号: R735.3|R730.54|R73-35
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2015.02.019

摘要

目的:建立一种荧光可视化显像且稳定过表达缺氧诱导因子-1 α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的裸鼠结直肠癌移植瘤模型.方法:对不同的人结直癌细胞系(SW480、SW620、LOVO及HCT116细胞)用缺氧诱导剂CoCl2处理,根据HIF-1α被诱导表达的情况选择合适的靶细胞;将HIF-1α的cDNA序列克隆至慢病毒表达质粒pLV-TRC-EGFP,构建pLV-HIF1 α-EGFP慢病毒表达质粒,并包装过表达HIF-1α的慢病毒颗粒Lenti-HIF1 α-EGFP.将Lenti-HIF1 α-EGFP感染SW480细胞,嘌呤霉素筛选稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1 α,Western blotting检测SW480HIF-1仪细胞内HIF-1α及其下游蛋白VEGF、M1型丙酮酸激酶(pyruvate kinase expression M1,PKM1)的表达情况,Transwell实验检测其迁移能力.裸鼠腹腔注射SW480HIF-1n建立结直肠癌移植瘤模型,倒置荧光显微镜观察裸鼠腹腔移植瘤结节.结果:常氧条件下4种结直肠癌细胞均不表达HIF-1α,经CoCl2诱导后,除SW480细胞系以外的细胞均可被诱导表达HIF-1α,故选择SW480细胞作为研究靶细胞.成功构建稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1d,SW480HIF-1α细胞内HIF-1 α、VEGF和PKM1的表达水平均高于野生型SW480细胞,其迁移能力较野生型SW480细胞显著增强[观察视野内迁移细胞数:(250±11)vs(50±5)个,P＜0.01].SW480HIF-1 α组裸鼠肠壁形成肿瘤结节数量显著多于SW480组[(15±4)vs(4±1)个,P＜0.05].结论:成功建立了高表达HIF-1 α的荧光可视化裸鼠移植瘤模型,为进一步的相关功能学研究以及药物筛选提供条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨生生	第二军医大学生物化学与分子生物学教研室	27	104	6.0	9.0
2	殷佩浩	上海中医药大学附属普陀中心医院普通外科	96	434	12.0	16.0
3	李喆	同济大学附属第十人民医院甲状腺乳腺外科	11	67	4.0	8.0
4	叶小磊	宁波市医学科学研究所药物与药理研究室	22	55	4.0	5.0
5	陈磊	同济大学附属第十人民医院甲状腺乳腺外科	15	56	4.0	7.0
6	胡送娇	上海中医药大学附属普陀中心医院普通外科	4	2	1.0	1.0