长滩军团菌临床分离株与环境分离株全菌蛋白的比较与分析

• 作者: 何金蕾 余泽英 张俊荣 彭冉 曾瑾 李娜丽莎 陈琦伟 陈达丽 龚艳菊
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 军团菌 全菌蛋白 差异表达蛋白 双向电泳(2-DE)
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 141-144,164
• 分类号: R378
• 语种: 中文

摘要

目的 采用蛋白质组学方法,对长滩军团菌血清1型临床分离株(LL-1)与环境分离株(CD-1)全菌蛋白进行比较和分析,探索军团菌临床株与环境分离株是否存在蛋白表达差异,为进一步认识、研究军团菌提供依据.方法 培养、收集CD-1与LL-1菌株,用超声兼尿素-3-[(3-胆酰胺丙基)-乙二胺]-1丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法提取全菌蛋白,SDS-PAGE及Western blot对二者全菌蛋白进行初步比较,确定二者全菌蛋白表达存在差异后,采用双向电泳(2-DE)联合MALDI-TOF-TOF质谱深入研究,并对质谱鉴定的差异点进行Westernblot验证.结果 初步SDS-PAGE及Western blot试验表明,CD-1与LL-1存在蛋白表达差异.进一步的2-DE研究结果共获得142个蛋白.CD-1与LL-1相比,18个蛋白点表达上调、19个蛋白表达下调.对其中显著差异的四个点进行质谱分析、Mascot软件查询、蛋白数据库搜库后证实CD-1表达下调的为热休克蛋白70(Chaperone protein DnaK)和30 s核糖体蛋白S1(30S ribosomal protein S1);CD-1表达上调的蛋白为假想蛋白TP04_0359(hypothetical protein TP04_0359)和一个未知蛋白.对进行质谱分析的四个蛋白点进行Western blot验证确实是军团菌蛋白.结论 LL-1与CD-1蛋白表达存在差异,此试验为进一步研究军团菌毒力和致病及疫苗研制奠定了基础.