制备转基因模型小鼠的基础：人白细胞抗原A*0206基因慢病毒载体构建及鉴定

• 作者: 张修彦 张晓玉 詹纯列
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 鼻咽癌 转基因小鼠 慢病毒 人白细胞抗原 绿色荧光蛋白 四质粒包装系统 流感病毒血凝素 巨细胞病毒启动子 质粒
• 年，卷（期）: 2015,（24）
• 所属期刊栏目: 组织构建实验造模
• 页码范围: 3813-3817
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 4939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.24.009

摘要

背景：有研究表明人白细胞抗原-A*0206亚型与鼻咽癌的发生正相关，但目前还没有相应的转基因动物模型，以用于从整体水平评价HLA-A*0206与鼻咽癌的关系及进一步研究免疫和基因疗法。目的：构建 pLVX-CMV-人白细胞抗原-A*0206-HA-mCMV-ZsGreen 载体，并进行病毒包装，以用于HLA-A*0206转基因小鼠制作。方法：合成HLA-A*0206序列，利用聚合酶链式反应在5’端引入Eco RⅠ酶切位点，在3’端引入Bam HⅠ酶切位点和流感病毒血凝素标签，Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切目的片段及pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen质粒，连接酶切产物，转化到大肠杆菌 JM109感受态细胞，双酶切及测序鉴定阳性重组质粒，阳性重组质粒与四质粒包装系统共转染表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系293T细胞，产生含目的基因的慢病毒。结果与结论：凝胶电泳及测序证实人白细胞抗原A*0206基因成功导入pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen骨架质粒，转染293T细胞48 h后的转染率为92%。荧光法测定病毒滴度，获得病毒滴度约为5×108。结果证实，实验成功构建了含巨细胞病毒启动子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素标签以及ZsGreen报告基因的慢病毒。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹纯列	广州军区广州总医院动物实验中心	74	554	13.0	21.0
2	张修彦	广州军区广州总医院动物实验中心	13	66	4.0	8.0
3	张晓玉	广州军区广州总医院动物实验中心	6	13	2.0	3.0