共表达内溶素和人溶菌酶基因的重组腺病毒构建

• 作者: 弓建芳 张东超 李小慧 李萌 金天明 高珂珂 龙雨清
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 内溶素 人溶菌酶 共表达 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S859.1
• 字数: 3510字
• 语种: 中文

摘要

为研究内溶素SAL-2和人溶菌酶hLYZ的联合抑菌作用,本研究通过PCR方法分别从携带SAL-2和hLYZ基因的质粒中扩增目的片段,连接至腺病毒穿梭载体的多克隆位点上,构建重组穿梭载体pShuttle-SAL和pShuttle-LYZ.成功构建的重组穿梭质粒与Ad-easy骨架质粒在BJ5183中发生同源重组,重组得到的阳性重组腺病毒载体在脂质体介导下转染HEK293细胞,包装产生重组腺病毒Ad-SAL、Ad-LYZ、Ad-SAL-LYZ和对照重组腺病毒Ad-GFP,通过RT-PCR和Western blot方法检测mRNA和蛋白表达后,将构建的重组腺病毒进行扩增纯化并测定病毒滴度.结果表明,成功构建的重组腺病毒感染细胞后,SAL-2和hLYZ基因的mRNA均有表达,Western blot分别检测到28.6 ku和14.7 ku目的蛋白条带.扩增纯化后经TCIDw方法检测病毒滴度分别为108.7 TCiD50/mL、108, 50 TCID50/mL、108.63 TCID50/mL和107.60 TCID50/mL.表明成功构建包装的重组腺病毒对HEK293细胞具有较强的感染能力,可稳定介导SAL-2基因和hLYZ基因在HEK293细胞中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张东超	天津农学院动物科学与动物医学学院	11	28	3.0	5.0
2	弓建芳	天津农学院动物科学与动物医学学院	10	28	3.0	5.0
3	高珂珂	天津农学院动物科学与动物医学学院	11	27	3.0	5.0
4	李小慧	天津农学院动物科学与动物医学学院	11	27	3.0	5.0
5	金天明	天津农学院动物科学与动物医学学院	74	139	6.0	9.0
6	李萌	天津农学院动物科学与动物医学学院	4	4	1.0	2.0
7	龙雨清	天津农学院动物科学与动物医学学院	5	4	1.0	2.0