大肠杆菌表达几丁质酶对不同底物的酶学性质及其降解产物分析

• 作者: 吕梦圆 夏祥 林建国 石佳仙 胡瑛 蔡俊
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 几丁质酶 大肠杆菌 纯化 酶学性质 酶解产物
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 26-32
• 页数: 7页
• 字数: 5692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201503005

摘要

采用重组大肠杆菌大量表达几丁质酶LICHI18A,经Ni-NTA柱纯化后,对不同底物的酶学性质进行了研究,以Lineweaver-Burk双倒数作图法测定米氏常数,采用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对降解产物进行分析.结果表明,该几丁质酶分子量为54 kDa,对水溶性壳聚糖的Km和Vmax分别为4.04 mg/mL和222.2μmol/(min·mg);对水溶性壳聚糖的反应最适温度和pH分别为60℃和7.0;对胶体几丁质的Km和Vmax分别为2.913 mg/mL和2.836 μmol/(min·mg),反应最适温度和pH分别为40℃和5.0.Ni2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对胶体几丁质的降解有明显的促进作用,但对水溶性壳聚糖的降解没有促进作用,且Ni2+和Zn2+有一定的抑制作用.Tween-80对降解胶体几丁质起一定的促进作用,而不同浓度的SDS有抑制酶活作用,且浓度越高抑制作用越强.TLC和HPLC分析结果表明,该酶降解胶体几丁质的产物主要为几丁二糖和单糖,而水溶性壳聚糖的降解产物较为复杂,主要有单糖、几丁二糖和甲壳寡糖.