干扰P2X7R基因对RAW264．7细胞增殖和吞噬的影响

• 作者: 向国安 周欣 姬文婕 张译丹 彭守春 林志春 苏程程 陈雪芬 马永强 魏路清
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: P2X7 受体 RNA干扰 RAW264.7巨噬细胞 细胞增殖 细胞吞噬
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: ? 论 著?
• 页码范围: 2065-2069
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4042字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.023

摘要

目的：应用RNA干扰技术抑制小鼠巨噬细胞RAW264．7细胞P2X7受体（ P2X7 R）基因的表达，建立稳定干扰细胞株，并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体法将P2X7 R shRNA重组质粒转染至RAW264．7细胞，经 G418筛选后获得稳定干扰细胞株。细胞分为野生型（ WT ）组、阴性对照（ NC ）组和干扰（shP2X7R）组。 Real－time PCR法检测细胞中P2X7R mRNA的表达，Western blot检测细胞中P2X7R蛋白的表达；CCK－8方法检测细胞生长活性，5－乙炔基－2’－脱氧尿苷（5－ethynyl－2’－deoxyuridine，EdU）掺入实验检测细胞增殖活性；流式细胞术分析细胞周期的分布和吞噬情况。结果：P2X7 R shRNA能明显抑制RAW264．7细胞的P2X7 R mR－NA和蛋白的表达，抑制率在80％以上。48 h后，shP2X7R组细胞的生长速度明显高于NC组和WT组（P＜0．05），增殖期细胞比例明显升高（P＜0．05），说明下调P2X7R基因能明显促进细胞增殖。 shP2X7R组的细胞周期出现改变，S期和G2／M期的比例明显上升，增殖指数增高（P＜0．05）。 shP2X7R组的细胞吞噬活性明显高于NC组（P＜0．05）。结论：本研究成功构建了稳定干扰P2X7 R基因表达的小鼠巨噬细胞株RAW264．7，shP2X7 R能够明显促进RAW264．7细胞的增殖，改变了细胞的吞噬活性。