粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析

• 作者: 刘晓宇 刘玉琳 林建立 耿晓瑞 范小琴 詹政科
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 铁蛋白 蛋白表达 纯化 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 927-930,937
• 页数: 5页
• 分类号: R384.4
• 字数: 3396字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2015.10.007

摘要

目的：为了获得粉尘螨铁蛋白（ferritin）蛋白，并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列，设计出相应的引物，提取粉尘螨总RNA ，采用RT‐PCR方法扩增出铁蛋白基因，PCR产物克隆入pET32a载体，构建的重组质粒pET32a‐ferritin ，经酶切和测序鉴定后，再转化至大肠杆菌BL21（DE3），异丙基‐β‐D‐硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。用十二烷基磺酸钠‐聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）鉴定其表达效果，用 Ni＋离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了 pET32a‐ferritin重组质粒；粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543 bp ，编码179个氨基酸，PI 5．35；SDS‐PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌 Bl21（DE3）中获得良好的表达，经亲和层析纯化后，表达产物分子质量约为20 kD。经生物信息学分析，粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点，亲水区域大于疏水区域，属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白，经纯化后获得较高纯度的重组蛋白，并对其三级结构进行分析，为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘玉琳	南昌大学医学院免疫学教研室	17	39	3.0	5.0
2	刘晓宇	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	42	160	7.0	11.0
3	林建立	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	4	3	1.0	1.0
4	詹政科	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	5	22	2.0	4.0
5	范小琴	深圳大学耳鼻咽喉科研究所	2	3	1.0	1.0
6	耿晓瑞	深圳大学耳鼻咽喉科研究所	1	0	0.0	0.0