小鼠小肠干细胞谱系追踪方法的建立及其在放射损伤中的应用

• 作者: 善亚君 崔宇 徐铁柱 李中堂 杨超 柳晓兰 王丽梅 王俊可 赵致维
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小肠干细胞 谱系追踪 辐射损伤
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 349-353
• 分类号: R818.04
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2015.05.03

摘要

目的 利用Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法,用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用,并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响.方法 通过基因型分析鉴定Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠.他莫西芬诱导小鼠体内的荧光蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察诱导后小肠干细胞的分化.采用60Co γ射线(15Gy)照射Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠,观察辐射对小肠干细胞组织重建的影响.结果 提取鼠尾DNA通过PCR方法鉴定Lgr5基因(174bp),获得双阳性小鼠.他莫西芬(100mg/kg)单次诱导后,激光共聚焦观察到Lgr5+小肠干细胞在诱导后5d开始分裂,7d已到达绒毛顶端,14d少量绒毛全部带有荧光,45d更多的小肠绒毛中存在荧光细胞,而且更加稠密.但在15Gy照射后小鼠小肠绒毛脱落严重,隐窝处没有荧光出现.结论 成功建立了小肠干细胞谱系追踪模型,并初步观察了辐射对小肠干细胞损伤的影响.