缺氧调控端粒酶活性及抑制鼻咽癌细胞增殖实验研究

• 作者: 付新洒 刘艳慧 史欣 文忠 李冠雪 申聪香
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 缺氧诱导因子 端粒酶 RNA干扰 逆转耐药
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 实践研究/论著
• 页码范围: 507-513
• 分类号: R739.63
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨缺氧及siRNA沉默缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)后对鼻咽癌细胞中端粒酶催化亚单位(telomerase catalytic subunit,hTERT)、细胞周期和化疗耐药的影响.方法 采用三气培养箱对鼻咽癌细胞5-8F和CNE2进行缺氧处理(1％ O2),蛋白质印迹法检测不同乏氧时相(0～72 h) HIF-1α和hTERT蛋白的表达.将HIF-1α基因特异性siRNA分别转染鼻咽癌细胞株5-8F和CNE2,筛选出沉默效率最高的siRNA,实验分为未处理组(常氧)、未处理组(缺氧)、Negative-siRNA(缺氧)和H1F-1α-siRNA(缺氧),荧光定量PCR及蛋白质印迹检测瞬时转染后hTERT及HIF-1α的表达.流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析缺氧或沉默HIF-1α后对细胞周期的影响.MTT法检测缺氧或沉默HIF-1α后,鼻咽癌细胞对顺铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗敏感性.结果 缺氧处理0～72 h后鼻咽癌5-8F细胞HIF 1α(F=37.147,P＜0.001)和hTERT(F=70.069,P＜0.001)蛋白的表达上调,差异有统计学意义.HIF-1α-siRNA对5 8F细胞瞬时转染率＞98％.HIF-1α-siRNA组hTERT mRNA表达量为0.37±0.05,显著低于未处理组(缺氧)的1.00±0.00和Negative-siRNA(缺氧)的0.95±0.01,F=360.339,P＜0.001;hTERT蛋白表达量为(0.27±0.05),显著低于未处理组(缺氧)0.54±0.00和Negative-siRNA组(缺氧)0.53±0.01,F=24.010,P＜0.001.未处理组(缺氧)G0/G1期细胞比例明显增加(45.63±2.01)％,显著高于未处理组(常氧)的(26.75±1.28)％,P＜0.001.5-8F细胞未处理组(常氧)对5-FU的IC50分别为(17.30±3.31) μg/mL,未处理组(缺氧)为(32.04±12.75) μg/mL,Negative-siRNA组为(33.90±0.87) μg/mL,HIF-1α-siRNA组为(13.72±2.36) μg/mL,F=3.704,P＜0.001.5-8F细胞缺氧组对DDP的化疗敏感性也降低,沉默HIF-1α后,5-8F细胞对DDP的化疗敏感性明显提高.除细胞周期外,CNE2与5-8F的结果均一致.结论 缺氧促使鼻咽癌细胞发生G1/S阻滞及化疗耐药,可能与上调hTERT表达,进而上调端粒酶活性有关;沉默HIF-1α显著逆转缺氧诱导的肿瘤耐药并下调端粒酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘艳慧	新疆医科大学第二附属医院耳鼻咽喉科	24	77	6.0	7.0
2	文忠	南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科	20	71	5.0	7.0
3	申聪香	南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科	7	20	3.0	4.0
4	李冠雪	南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科	4	7	2.0	2.0
5	史欣	南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科	2	4	1.0	2.0
6	付新洒	南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科	1	1	1.0	1.0