荧光共振能量转移技术阳性参照质粒的构建及应用

• 作者: 张进禄 徐志卿 肖忠新 薛冰 赵君朋 邓君 金良韵 金艳燕
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 质粒构建 荧光共振能量转移 转移效率 荧光融合蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1074-1078
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4087字
• 语种: 中文
• DOI: 11.13753/j.issn.1007-6611.2015.11.006

摘要

目的 构建青色荧光蛋白(CFP)基因和黄色荧光蛋白(YFP)基因相连接的真核表达载体pYFP-CFP,并检测融合蛋白CFP-YFP的FRET转移效率,为FRET技术提供阳性参照物. 方法 利用基因重组法,以带有CFP基因序列的质粒(pCFP)为模板,扩增CFP基因并插入黄色荧光蛋白载体(pYFP)的多克隆位点中,构建真核表达质粒pYFP-CFP.经细胞转染后,使其表达CFP和YFP相连的融合蛋白.在激光共聚焦显微镜下采集FRET信号图和FRET转移效率(EFRET)的计算,并比较和分析表达CFP-YFP的阳性细胞与CFP和YFP共表达的阴性细胞. 结果 真核表达质粒pYFP-CFP构建成功,并在细胞质中表达,这与pCFP和pYFP共转染的细胞中荧光蛋白的分布略有不同,后者在细胞胞质和细胞核中均有表达.统计结果显示表达融合蛋白的阳性组EFRET明显高于共表达的阴性组,差异有统计学意义. 结论 融合荧光蛋白分子的青色和黄色蛋白之间具有10个氨基酸残基相连,符合FRET现象发生的条件,能够采集到很强的FRET信号,可作为FRET研究的稳定阳性实验参照.