外源性NO对脂肪干细胞成软骨分化的影响

• 作者: 于湄 刘爽 田卫东 罗小昕 郭维华 黄海森
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 外源性一氧化氮 脂肪干细胞 成软骨分化 TGF-β1
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10,21
• 语种: 中文

摘要

目的 通过观察不同浓度外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(SNP)对脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖状况及相关基因表达的影响,探讨外源性NO在ADSCs成软骨分化中的作用.方法 获取并培养ADSCs,分别进行成骨和成脂诱导,采用茜素红染色和油红O染色进行多向分化鉴定.NO检测试剂盒检测ADSCs成软骨分化过程中NO的变化;采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测不同浓度SNP(0.25 mmol/L、1.00 mmol/L、4.00 mmol/L)下ADSCs的增殖情况.以Real time-PCR(RT-PCR)方法检测ADSCs在不同浓度SNP下,表达转化生长因子-β1 (TGF-β1)以及成软骨分化特异基因——信号传导蛋白Smad3、Ⅱ胶原蛋白(Col-Ⅱα1)基因的变化.结果 培养的细胞经成骨和成脂诱导后茜素红染色和油红O染色呈阳性;ADSCs成软骨分化过程中,培养上清液中NO浓度始终比对照组高(P＜0.05);与对照组相比,低浓度SNP(0.25 mmol/L、1.00 mmol/L)对ADSCs的增殖无明显影响(P＞0.05),高浓度SNP(4.00 mmol/L)抑制ADSCs增殖,差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测发现SNP能抑制ADSCs自身TGF-β1 mRNA的表达,同时抑制Smad3 mRNA和Col-Ⅱα1 mRNA的表达.结论 在ADSCs成软骨分化过程中,外源性NO可以通过抑制ADSCs自身产生TGF-β1,并且抑制TGF-β下游信号通路,从而抑制成软骨分化.