副猪嗜血杆菌Wza基因缺失株的构建及生物学特性研究

• 作者: 康磊 徐丽华 李军星 江军 王一成 蒋佳颖 袁秀芳 闵智宇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 自然转化 △Wza缺失株 荚膜 抗吞噬作用 致病性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 806-815
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.06.013

摘要

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)荚膜多糖目前被认为是其主要的毒力因子之一,其Wza基因在荚膜多糖的合成运输方面起重要作用.本研究通过构建pUC18-LR-Kan同源重组质粒和运用自然转化法,以Kan抗性的TSA平板成功筛选出Wza基因缺失株(ZJ1208-△Wza).生物学特性研究表明,ZJ1208-△ Wza缺失株和ZJ1208野毒株的菌落形态无明显差异,荚膜染色镜检表明在体外培养二者都能形成较薄的荚膜.在体外培养的生长速率方面,二者都在约12h时其OD600达到最大值,其中ZJ1208-△Wza缺失株OD600为1.246,而ZJ1208野毒株为2.196,高于ZJ1208-△Wza株0.95;二者活菌数在约8h多达到最大,ZJ1208野毒株活菌数对数值为9.763 4,ZJ1208-△ Wza缺失株株约为9.322 2,低于ZJ1208野毒株.菌体形态方面,在培养6h左右,ZJ1208-△Wza缺失株菌体大多数可形成长链状或长杆状,而野毒株大多数为较松散,短小的单个菌体.与ZJ1208野毒株比较,ZJ1208-△Wza株有较快的体外沉降速率,对猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的吞噬作用更加敏感,对小鼠毒力明显减弱;以上结果表明,Wza基因的缺失对HPs ZJ1208株的多项生物学特性产生了影响.本研究为进一步研究Wza基因在HPs荚膜形成中的作用提供基础资料.