人水通道蛋白4胞外区的原核表达及纯化

• 作者: 张婧 张迎娜 方华 杜英 潘卫东 赵雪 高峰
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 水通道蛋白4 原核细胞 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 601-606
• 页数: 6页
• 分类号: R744.5+2
• 字数: 4085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2015.05.003

摘要

目的：利用原核表达系统融合表达人水通道蛋白4（ AQP4）胞外区，并进行纯化及鉴定。方法：根据大肠埃希菌密码子偏嗜性及后续实验需要设计并人工合成AQP4胞外区序列，退火形成双链后克隆至pET32 a （＋）载体，构建原核重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni2＋亲和层析柱纯化后，进行SDS-PAGE和Western blot 鉴定。结果：重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确；表达的融合蛋白pET32a（＋）A-QP4胞外区相对分子质量约为26000，可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合，可以可溶性形式存在于上清液中，纯化的融合蛋白纯度达70％以上。结论：成功构建了重组表达质粒pET32a（＋）-AQP4胞外区，并成功表达融合蛋白。