宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响

• 作者: 于啸 徐小惠 殷复粉 毕晓宁 王宁 王言奎
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶31基因 甲基化 人乳头病毒16 宫颈癌 生物标志
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 641-651
• 页数: 11页
• 分类号: R737.33
• 字数: 5688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2015.09.001

摘要

背景与目的：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶31(serine/threonine kinases 31，STK31)基因在人类多种癌症中扮演重要角色，且STK31基因的表达受其启动子及第一外显子区甲基化状态的影响；病毒感染与肿瘤组织中某些抑癌基因启动子区高甲基化有关。本研究旨在探讨宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7癌基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响，以及不同种类甲基转移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)基因在STK31基因甲基化中的潜在作用。方法：构建外源性HPV16 E6、E7以及E6/E7基因共表达慢病毒，分别感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)阴性宫颈癌细胞系HT-3及C33A，获得稳定转染的细胞系；采用亚硫酸氢盐基因组测序法(bisulfite genomic sequencing，BGS)和甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR，MSP)检测3种HPV阳性宫颈癌细胞系HeLa、SiHa和CasKi以及HPV阴性宫颈癌细胞系HT-3和C33A转染前后STK31基因的甲基化状态；RT-PCR及蛋白[质]印迹法(Western blot)检测上述宫颈癌细胞系中STK31基因的表达以及DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3L基因在HPV16转染前后宫颈癌细胞系及HPV阳性、HPV阴性宫颈癌组织中的表达情况。结果：外源性HPV16 E6、E7以及E6/E7基因可在HPV阴性宫颈癌细胞系中稳定表达。3种HPV阳性细胞系HeLa、SiHa和CasKi中STK31基因呈低甲基化状态，STK31 mRNA及蛋白质表达阳性；2种HPV阴性细胞系HT-3、C33A中STK31基因则表现为高甲基化状态，STK31 mRNA及蛋白质表达缺失；与未感染慢病毒HT-3和C33A细胞系比较，外源性HPV16 E7以及E6/E7表达的HT-3和C33A细胞系STK31基因甲基化程度降低，其mRNA及蛋白质重新表达。DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因在HT-3E6/E7和C33AE6/E7细胞系中mRNA水平分别高于HT-3空载细胞系和C33A空载细胞系，差异有统计学意义(P<0.001)。DNMT1、DNMT3a和DN-MT3b基因的mRNA水平在HPV16阳性宫颈癌组织中的表达高于其在HPV阴性宫颈癌组织中的表达，差异有统计学意义(t=5.997，P<0.001；t=6.743，P<0.001；t=7.926，P<0.001)。DNMT2在HT-3E6/E7和C33AE6/E7细胞系中mRNA表达水平分别低于HT-3空载细胞系和C33A空载细胞系，差异有统计学意义(t=7.451，P<0.001；t=2.451， P<0.05)；DNMT2基因转录水平在HPV16阳性宫颈癌组织中低于HPV阴性宫颈癌组织(t=9.134，P<0.001)。DN-MT3L mRNA表达水平在宫颈癌细胞系转染前后及HPV阴阳性宫颈癌组织中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论：HPV感染可导致STK31基因启动子及第1外显子区甲基化状态降低，低甲基化状态促进该基因表达。STK31基因的表达受其启动子及第1外显子区甲基化状态的调控。HPV16 E7、E6/E7基因可能通过影响DNMT2的表达参与调控癌基因STK31基因启动子及第1外显子区甲基化状态。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王言奎	青岛大学医学院附属医院妇产科	101	397	10.0	14.0
2	王宁	青岛大学医学院附属医院妇产科	56	204	7.0	11.0
3	毕晓宁	青岛大学医学院附属医院妇产科	3	27	2.0	3.0
4	徐小惠	青岛大学医学院附属医院妇产科	2	23	2.0	2.0
5	殷复粉	青岛大学医学院附属医院妇产科	3	29	2.0	3.0
6	于啸	青岛大学医学院附属医院妇产科	8	36	3.0	6.0