重组GAL基因型酿酒酵母菌株的生长、发酵及遗传稳定性研究

• 作者: 何国庆 张伟 郭钦 阮晖
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: GAL1 GAL4 重组酵母 半乳糖 发酵性能
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 720-726
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.06.003

摘要

半乳糖激酶基因(GAL1)启动子是酿酒酵母(Saccharumyces cerevisiae)表达外源蛋白的高效诱导性启动子,其表达效率受到GAL4的调控和半乳糖的诱导,改变酵母的GAL基因型有助于提高外源蛋白的表达水平,但重组GAL菌株的菌株特性仍需要进一步研究以确保蛋白表达的稳定性.本研究分别对敲除了不同GAL1和插入不同GAL4基因拷贝数的重组GAL基因型酵母进行了生长发酵性能和遗传稳定性研究.结果表明,重组菌株的GAL基因型在传代过程中较为稳定,没有发生回复突变和遗传霉素(G418)和博来霉素(Zeocin)抗性恢复的情况;与对照原始MS-1酵母相比,重组菌株(SG1、DG115、DPG65和GQ21)的生长性能在葡萄糖培养基中的生物量略有下降.与半乳糖诱导培养基(yeast peptone galactose,YPG)相比,GAL1基因的敲除在甘油培养基(yeast peptone galactose glycerin,YPGL)中对酿酒酵母半乳糖利用的影响更为显著.其中,在YPG和YPGL培养基内,对照MS-1、SG1、DG115和DPG65利用完所有半乳糖分别需要20、20、20、26、20、44、44和68 h,而GQ21均无法利用半乳糖.GAL基因的敲除和插入没有影响酿酒酵母的热致死温度,原始菌株和重组菌株皆为54℃.本研究将为工业利用酵母表达系统大规模、低成本生产重组蛋白提供研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何国庆	浙江大学食品与生物系统工程学院	279	3858	34.0	45.0
2	阮晖	浙江大学食品与生物系统工程学院	76	823	17.0	25.0
3	张伟	浙江大学食品与生物系统工程学院	93	456	11.0	17.0
4	郭钦	浙江大学食品与生物系统工程学院	17	47	5.0	6.0